UHRF1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403851-NIC

UHRF1 (ubiquitin-like con domini PHD e RING finger 1) è un regolatore epigenetico multidominio che coordina il mantenimento della metilazione del DNA e l’ereditarietà dello stato della cromatina durante la fase S. Riconoscendo i siti CpG emimetilati e i segni dell’istone H3, UHRF1 recluta e stimola DNMT1 e interagisce con i complessi responsabili dell’ubiquitinazione e della deacetilazione degli istoni per preservare i programmi trascrizionali. La sua attività supporta la progressione del ciclo cellulare, l’assemblaggio della cromatina accoppiato alla replicazione e la stabilità del genoma attraverso la regolazione dell’organizzazione dell’eterocromatina e delle risposte al danno al DNA. Un’espressione deregolata di UHRF1 e pattern di metilazione dipendenti da UHRF1 alterati sono frequentemente associati al silenziamento aberrante di vie oncosoppressorie e a un più ampio rimodellamento dell’epigenoma nella biologia del cancro.

UHRF1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus UHRF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di UHRF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di UHRF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con UHRF1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.