Plasmide CRISPR/Cas9 KO UBXN2B (h): sc-407871

Présentation

UBXN2B (protéine à domaine UBX 2B) est un adaptateur de la famille UBX impliqué dans le contrôle de la qualité des protéines dépendant de l’ubiquitine, en reliant des substrats polyubiquitinylés à l’ATPase AAA+ p97/VCP afin de permettre leur extraction et leur traitement ultérieur par le protéasome. Par ce rôle, UBXN2B contribue à la régulation de la dégradation associée au réticulum endoplasmique (ERAD), au renouvellement des protéines mal repliées ou endommagées, et au maintien de la protéostasie lors du stress cellulaire. La perturbation des réseaux de cofacteurs p97–UBX est largement pertinente pour des voies qui régissent la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et la signalisation du stress, lesquelles façonnent la viabilité cellulaire et les programmes de différenciation. En tant que nœud des circuits du système ubiquitine–protéasome (UPS), UBXN2B présente un intérêt pour des études mécanistiques dans des contextes où un déséquilibre de la protéostasie et une clairance protéique aberrante contribuent à des phénotypes pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UBXN2B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène UBXN2B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du UBXN2B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert UBXN2B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UBXN2B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en UBXN2B pour l'étude de la signalisation de UBXN2B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de UBXN2B essentiels à la fonction de UBXN2B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de UBXN2B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UBXN2B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le UBXN2B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus UBXN2B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UBXN2B plasmide HDR (h) et le UBXN2B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie UBXN2B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles UBXN2B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.