Plásmido CRISPR de Activación (h) Tyro3: sc-401412-ACT

El gen humano **TYRO3** codifica **Tyro3**, una tirosina cinasa receptora de la familia TAM que se activa por los ligandos dependientes de vitamina K **GAS6** y **PROS1** y señaliza en conjunción con contextos de unión a fosfatidilserina. Tras su activación, Tyro3 regula la supervivencia, la proliferación y la migración celulares mediante vías que incluyen **PI3K–AKT**, **MAPK/ERK** y la señalización **STAT**, y contribuye a la eferocitosis y a la atenuación de la inmunidad innata a través de la retroalimentación negativa mediada por TAM. La actividad de TYRO3 influye en la homeostasis celular en tejidos inmunitarios y neurales, y se ha asociado con señalización inflamatoria alterada y fenotipos oncogénicos en diversos contextos tumorales. Como parte de la red TAM junto con **AXL** y **MERTK**, Tyro3 también participa en la comunicación cruzada entre receptores que moldea las respuestas de citocinas, la eliminación fagocítica y la remodelación tisular.

Tyro3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TYRO3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Tyro3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TYRO3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TYRO3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Tyro3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TYRO3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Tyro3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Tyro3 en células tumorales con expresión de TYRO3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.