twist Lentiviral Activation Particles (h): sc-400108-LAC

TWIST1 kodiert Twist, einen basischen Helix-Loop-Helix-Transkriptionsfaktor, der die Spezifizierung mesenchymaler Zelllinien, die Morphogenese sowie Programme der epithelial–mesenchymalen Transition (EMT) reguliert. Twist verknüpft entwicklungsbiologische Transkriptionsnetzwerke mit Signalwegen wie TGF-β, WNT/β‑Catenin und PI3K/AKT, um Zellschicksalsentscheidungen, Überleben und die Expression motilitätsassoziierter Gene zu modulieren. Eine fehlregulierte TWIST1-Expression steht in verschiedenen Krebsarten mit veränderten Differenzierungszuständen, Invasivität und stammzellähnlichen Phänotypen in Zusammenhang, und Keimbahnstörungen sind mit kraniofazialen Entwicklungsstörungen einschließlich des Saethre–Chotzen-Syndroms assoziiert. Diese Eigenschaften machen TWIST1 zu einem zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung der transkriptionellen Kontrolle von Plastizität, Lineage-Switching und Reaktionen auf die Mikroumgebung in menschlichen Zellen.

twist Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TWIST1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

twist Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TWIST1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen twist-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TWIST1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.