Plasmide Double Nickase (h) TWIK-2: sc-407263-NIC

KCNK6 humain code TWIK-2, un canal potassique (K2P) à deux domaines poreux qui contribue à la conductance de fond du K+ et aide à déterminer le potentiel de membrane au repos ainsi que l’excitabilité membranaire. En modulant l’homéostasie ionique, TWIK-2 influence le couplage stimulus–sécrétion, la régulation du volume cellulaire et les processus de signalisation dépendants du Ca2+ dans les cellules excitables et non excitables. Des altérations de l’activité des canaux K2P ont été associées à une dérégulation du tonus vasculaire, de la signalisation inflammatoire et à des phénotypes liés à la prolifération, faisant de KCNK6 une cible pertinente pour des études mécanistiques sur la contribution des canaux ioniques aux voies cardiométaboliques et associées à l’immunité. La fonction de TWIK-2 est couramment étudiée via des mesures électrophysiologiques, l’analyse de la dynamique de signalisation intracellulaire et des analyses de perturbation au niveau des voies.

TWIK-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KCNK6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KCNK6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KCNK6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KCNK6.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.