Plásmido CRISPR de Activación (h) tsg 101: sc-400290-ACT

TSG101 (gen de susceptibilidad tumoral 101) codifica la proteína TSG101, un componente central del complejo ESCRT-I que coordina la clasificación endosomal, el reconocimiento de carga ubiquitinada y la biogénesis de cuerpos multivesiculares. Mediante la remodelación de membranas dependiente de ESCRT, TSG101 contribuye a la disminución de receptores, la citocinesis (abscisión), el tráfico asociado a la autofagia y la formación de exosomas, con funciones adicionales en la gemación de virus envueltos. La alteración del tráfico regulado por TSG101 puede modificar la dinámica de señalización de los receptores de superficie y las respuestas al estrés, vinculando esta vía con procesos oncogénicos, defectos de proteostasis asociados a la neurodegeneración y estudios sobre la replicación viral. Como adaptador ampliamente expresado en el tráfico de membranas, TSG101 se utiliza con frecuencia como punto de entrada mecanístico para investigar el transporte intracelular y la comunicación mediada por vesículas en células humanas.

tsg 101 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TSG101 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

tsg 101 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TSG101 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TSG101, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de tsg 101. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TSG101 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de tsg 101 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía tsg 101 en células tumorales con expresión de TSG101 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.