Plásmido Doble Nickase (h) TRP2/DCT: sc-400334-NIC

La DCT humana (dopacromo tautomerasa), también conocida como TRP2, es una enzima melanosómica de la vía biosintética de la eumelanina que cataliza la conversión de dopacromo a DHICA, determinando la composición del pigmento y el equilibrio redox en los melanocitos. Su expresión está regulada por programas de linaje melanocitario, como la transcripción dependiente de MITF, y se integra con los procesos de biogénesis y tráfico de los melanosomas. La actividad de DCT influye en las respuestas celulares al estrés oxidativo y en los estados de diferenciación, por lo que es relevante para estudios de la biología de la pigmentación y la función del melanocito. La desregulación de la expresión de DCT se analiza con frecuencia en el melanoma y en otros trastornos asociados a células pigmentarias como un marcador de identidad de linaje y de biología tumoral.

TRP2/DCT El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DCT en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DCT. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DCT. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DCT alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.