Tropomyosin β CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401580-ACT

TPM2はヒトのトロポミオシンβをコードする遺伝子であり、アクチン結合性のコイルドコイルタンパク質です。トロポミオシンβは線維状アクチンに沿って重合し、細いフィラメントの安定性や、ミオシンモーターがアクチンへアクセスする度合いを調節します。アクトミオシン収縮性を調整することで、トロポミオシンβは細胞骨格の組織化、サルコメアおよびストレスファイバーの動態、ならびに細胞形態・遊走・メカノトランスダクションを制御する経路に寄与します。TPM2の発現量とアイソフォームのバランスは、筋・非筋におけるアクチンフィラメントの特性化（機能分化）に影響し、筋原線維形成や細胞骨格リモデリングなどの過程と関連します。TPM2の遺伝学的な攪乱は先天性ミオパチーや拘縮表現型と関連づけられており、疾患関連の細胞モデルにおけるアクチンフィラメント制御の研究標的として重要です。

Tropomyosin β CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TPM2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Tropomyosin β CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TPM2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTPM2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Tropomyosin βの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTPM2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTropomyosin β依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTPM2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTropomyosin β経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。