TRIM8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-429995-ACT

Trim8 codifica a TRIM8, uma ligase E3 de ubiquitina da família de motivos tripartidos (TRIM) que regula a renovação proteica e a saída de sinalização por mecanismos dependentes de ubiquitina. Em células de camundongo, a TRIM8 tem sido implicada na modulação de vias inflamatórias e de resposta ao estresse, incluindo interação (crosstalk) com a sinalização de NF-κB e com reguladores de programas transcricionais dependentes de p53, influenciando assim o controle do ciclo celular e a apoptose. Ao moldar a estabilidade e a atividade de componentes dessas vias, a TRIM8 contribui para o controle dependente do contexto da sinalização imune inata e da homeostase celular. A atividade desregulada de TRIM8 tem sido associada a respostas imunes alteradas e a processos oncogênicos em modelos experimentais, tornando-a um ponto útil para investigar vias e fenótipos.

TRIM8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Trim8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRIM8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Trim8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Trim8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRIM8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Trim8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRIM8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRIM8 em células tumorais com expressão de Trim8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.