Plásmido CRISPR de Activación (h) TRIM26: sc-404871-ACT

TRIM26 (motivo tripartito que contiene 26) es una ligasa E3 de ubiquitina tipo RING de la familia TRIM que ayuda a regular la estabilidad de las proteínas y las salidas de señalización mediante mecanismos dependientes de la ubiquitinación. En células humanas, TRIM26 se ha vinculado con el control de la señalización inmune innata e inflamatoria, incluida la modulación de vías relacionadas con el interferón y de los programas transcripcionales posteriores. Al influir en el recambio y la actividad de intermediarios de señalización y reguladores de la transcripción, TRIM26 puede afectar las respuestas antivirales, la adaptación al estrés celular y la homeostasis inmunitaria. La expresión o actividad desregulada de TRIM26 se ha investigado en el contexto de trastornos inmunomediados y redes de señalización asociadas al cáncer, donde las alteraciones del sistema ubiquitina–proteasoma remodelan la expresión génica y las transiciones de estado celular.

TRIM26 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TRIM26 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TRIM26 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TRIM26 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TRIM26, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TRIM26. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TRIM26 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TRIM26 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TRIM26 en células tumorales con expresión de TRIM26 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.