Plasmide Double Nickase (m) TRB-3: sc-432803-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) TRB-3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TRB-3 Double Nickase (m) et le plasmide TRB-3 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Trib3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TRB-3 Antibody (D-4): sc-365842
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) TRB-3 | sc-432803-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Trib3* code TRB-3, une pseudokinase qui agit comme échafaudage sensible au stress, régulant la transduction du signal par des interactions plutôt que par une activité catalytique. TRB-3 module la signalisation PI3K–AKT via des interactions protéine–protéine, influence les réponses à l’insuline et la détection des nutriments, et s’articule avec les programmes de stress du réticulum endoplasmique (RE) et la réponse intégrée au stress. Elle a été associée à la régulation de l’apoptose, de l’autophagie et de l’expression de gènes métaboliques, via des voies comprenant notamment ATF4/CHOP et la signalisation MAPK. Une activité dérégulée de TRB-3 est fréquemment étudiée dans des contextes tels que les dysfonctionnements métaboliques, l’inflammation et l’adaptation au stress, dans des tissus incluant le foie, le tissu adipeux et les compartiments immunitaires.
TRB-3 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Trib3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Trib3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Trib3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Trib3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.