Topo IIIα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423471
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Topo IIIα O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Topo IIIα, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Topo IIIα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423471 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Top3a codifica a DNA topoisomerase III alfa (Topo IIIα), uma topoisomerase do tipo IA que resolve o stress topológico do DNA e intermediários de recombinação durante a replicação e a reparação. Em células de rato, a Topo IIIα atua no complexo BTRR com BLM, RMI1 e RMI2 para catalisar a dissolução de junções duplas de Holliday, limitando eventos de crossing-over e promovendo a manutenção fiel do genoma. Esta atividade liga a Topo IIIα a vias de recombinação homóloga, estabilidade da forquilha de replicação e segregação de cromátides-irmãs. A perturbação de processos associados à TOP3A está ligada a fenótipos de instabilidade genómica relevantes para estudos de biologia do cancro, defeitos do desenvolvimento e doenças de reparação do DNA em sistemas de mamíferos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Topo IIIα (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Top3a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Top3a, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Top3a na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Topo IIIα.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Top3a para a investigação da sinalização de Topo IIIα, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Top3a críticos para a função Topo IIIα
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Top3a para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Topo IIIα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Topo IIIα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Top3a. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Topo IIIα Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Topo IIIα (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Top3a para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Top3a definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.