Plásmido CRISPR de Activación (h) TMPRSS4: sc-416288-ACT

TMPRSS4 (proteasa serina transmembrana 4) es una proteasa serina transmembrana de tipo II expresada en la superficie celular, donde puede modular la proteólisis pericelular, la remodelación de la matriz extracelular y el comportamiento de las células epiteliales. Al influir en la señalización activada por proteasas y en las interacciones célula–célula o célula–matriz, TMPRSS4 se asocia con procesos como la migración, la invasión y la transición epitelio-mesénquima. Se han descrito alteraciones en la expresión de TMPRSS4 en múltiples contextos de tumores sólidos y, con frecuencia, se asocia a fenotipos agresivos y potencial metastásico, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de programas relacionados con la invasión. TMPRSS4 también es relevante para la investigación de redes de proteasas ancladas a membrana que regulan el procesamiento de receptores y la señalización aguas abajo en tejidos epiteliales.

TMPRSS4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TMPRSS4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TMPRSS4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TMPRSS4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TMPRSS4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TMPRSS4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TMPRSS4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TMPRSS4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TMPRSS4 en células tumorales con expresión de TMPRSS4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.