Plásmido CRISPR de Activación (h) TMPRSS11A: sc-415530-ACT

TMPRSS11A codifica una proteasa de serina transmembrana de tipo II que se localiza en la superficie celular y participa en la proteólisis pericelular en interfaces epiteliales. Al escindir sustratos extracelulares y asociados a la membrana, TMPRSS11A puede influir en los programas de diferenciación epitelial, el mantenimiento de la barrera y las redes de señalización activadas por proteasas que moldean la remodelación tisular y las respuestas inflamatorias. Su actividad se integra con cascadas más amplias de proteasas de serina y puede modular la disponibilidad de péptidos bioactivos y señales relacionadas con factores de crecimiento en el microambiente local. La expresión desregulada de proteasas de serina ancladas a la membrana, incluida TMPRSS11A, se ha asociado con cambios en la biología de las vías respiratorias y las mucosas, y se ha investigado en el contexto de la fisiopatología epitelial y de la remodelación de proteasas relacionada con el cáncer.

TMPRSS11A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TMPRSS11A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TMPRSS11A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TMPRSS11A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TMPRSS11A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TMPRSS11A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TMPRSS11A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TMPRSS11A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TMPRSS11A en células tumorales con expresión de TMPRSS11A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.