TIMP-4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402560

Descripción general

TIMP4 codifica el inhibidor tisular de las metaloproteinasas 4 (TIMP-4), un inhibidor endógeno secretado que se une a las metaloproteinasas de la matriz y limita su actividad para regular el recambio de la matriz extracelular (MEC). Al modular la proteólisis pericelular, TIMP-4 influye en la adhesión y migración celular, así como en programas de remodelación tisular que se interconectan con la señalización MEC–integrinas, las señales inflamatorias y la disponibilidad de factores de crecimiento. La expresión alterada de TIMP4 o el desequilibrio TIMP/MMP se estudia con frecuencia en contextos de fibrosis, remodelado vascular y dinámica del microambiente tumoral, donde la composición de la MEC y la actividad de las proteasas moldean los fenotipos celulares. TIMP-4 también participa en el control del procesamiento, dependiente de proteasas, de moléculas bioactivas, lo que lo hace relevante para el mapeo de vías en biología de la matriz y proteostasis.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TIMP-4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TIMP4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TIMP4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TIMP4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TIMP-4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TIMP4 para la investigación de la señalización de TIMP-4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TIMP4 críticos para la función de TIMP-4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TIMP4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TIMP-4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TIMP-4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TIMP4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TIMP-4 (h) y el plásmido HDR TIMP-4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TIMP4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TIMP4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.