Plasmide Double Nickase (m) Thy-1/CD90: sc-423390-NIC

Thy1 code la glycoprotéine de surface Thy‑1/CD90 ancrée au glycosylphosphatidylinositol (GPI), un marqueur conservé des neurones, des fibroblastes, des cellules stromales mésenchymateuses et de certains sous‑ensembles de lymphocytes T chez la souris. Thy‑1 participe aux interactions cellule–cellule et cellule–matrice via des partenaires de liaison tels que les intégrines et les syndécanes, influençant la dynamique des adhésions focales, le remodelage du cytosquelette et la mécanotransduction. Par ces processus, elle module la croissance des neurites, le guidage axonal et l’activation des cellules immunitaires, reliant la signalisation Thy‑1 au remodelage tissulaire et aux signaux inflammatoires. Une expression dérégulée de Thy‑1 a été associée à une activation stromale de type fibrotique, à la neuroinflammation et à des phénotypes du microenvironnement tumoral, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des voies de signalisation dépendantes de l’adhérence et de l’identité de lignée.

Thy-1/CD90 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Thy1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Thy1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Thy1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Thy1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.