Thrombospondin 1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400436-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Thrombospondin 1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Thrombospondin 1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Thrombospondin 1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf THBS1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Thrombospondin 1: sc-393504
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Thrombospondin 1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400436-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Thrombospondin 1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400436-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
THBS1 kodiert Thrombospondin 1, ein sezerniertes matrizelluläres Glykoprotein, das die Zell–Matrix-Kommunikation und den Umbau der extrazellulären Matrix moduliert. Thrombospondin 1 reguliert die Angiogenese über rezeptorvermittelte Signalwege, einschließlich Interaktionen, die die Aktivierung von latentem TGF-β, die Bindung an Integrine und CD47-abhängige Antworten beeinflussen. Es trägt zur Kontrolle von Zelladhäsion, Migration, Proliferation und inflammatorischer Signalgebung bei und verknüpft stromale Signale mit Programmen der Gewebereparatur. Eine dysregulierte THBS1-Expression wurde mit pathologischen Umbauprozessen in der Krebsbiologie, bei Gefäßerkrankungen sowie bei fibrotischen und entzündlichen Erkrankungen in Verbindung gebracht und ist daher für mechanistische Studien mikroenvironmentgetriebener Phänotypen relevant.
Thrombospondin 1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des THBS1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von THBS1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die THBS1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit THBS1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.