Plasmide Double Nickase (h) TET2: sc-400545-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TET2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TET2 Double Nickase (h) et le plasmide TET2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TET2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TET2 Antibody (C-7): sc-398535
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TET2 | sc-400545-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TET2 | sc-400545-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TET2 code une dioxygénase dépendante du Fe(II)/2‑oxoglutarate qui catalyse l’oxydation de la 5‑méthylcytosine en 5‑hydroxyméthylcytosine, ainsi qu’en dérivés oxydés ultérieurs, favorisant une déméthylation active et passive de l’ADN. Par la régulation épigénétique des enhancers et des corps des gènes, TET2 contribue à coordonner la différenciation hématopoïétique, les décisions de destinée des cellules immunitaires et des programmes transcriptionnels liés à l’accessibilité de la chromatine. L’activité de TET2 s’articule avec les processus de réparation de l’ADN et de déméthylation associés à la réplication, et elle est modulée par des signaux métaboliques influençant la disponibilité des cofacteurs des dioxygénases. Une perturbation des dynamiques de méthylation médiées par TET2 est fréquemment associée à une altération de l’homéostasie des lignées myéloïdes et lymphoïdes, et elle est largement étudiée dans le contexte de l’hématopoïèse clonale et des mécanismes des hémopathies malignes.
TET2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TET2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TET2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TET2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TET2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.