TBX5 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-423282-LAC

O gene Tbx5 de camundongo codifica o TBX5, um fator de transcrição da família T-box que se liga a motivos de DNA específicos de sequência para coordenar programas de regulação gênica durante o desenvolvimento embrionário e o padrão de tecidos. O TBX5 é um determinante central da morfogênese cardíaca e da especificação dos membros anteriores, integrando redes transcricionais que controlam a diferenciação de cardiomiócitos, a formação das câmaras e a maturação do sistema de condução. Ele atua em conjunto com outros fatores de linhagem, como NKX2-5 e proteínas GATA, para regular enhancers que controlam genes estruturais e eletrofisiológicos. A desregulação da dosagem ou da atividade de TBX5 está associada a malformações congênitas do coração e dos membros, tornando-o um nó valioso para o estudo da regulação gênica do desenvolvimento e das relações genótipo–fenótipo em modelos murinos.

As Partículas de Ativação Lentivirais TBX5 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Tbx5 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais TBX5 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Tbx5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de TBX5. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Tbx5 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.