TAUT CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402918-ACT

SLC6A6 kodiert den humanen Taurintransporter TAUT, einen natrium- und chloridabhängigen Membrantransporter, der die hochaffine Aufnahme von Taurin vermittelt und so die intrazellulären Taurin-Pools aufrechterhält. Taurin trägt zur Osmoregulation, Membranstabilisierung, Calcium-Homöostase und Redox-Balance bei und verknüpft die TAUT-Aktivität mit der Anpassung an zellulären Stress, der mitochondrialen Funktion und der Regulation der Apoptose. Eine veränderte SLC6A6/TAUT-Expression oder Taurin-Transportkapazität wurde mit einer gewebespezifischen Vulnerabilität in erregbaren Systemen, darunter Retina, Herz und Nervensystem, in Verbindung gebracht und wird in Kontexten von metabolischem Stress und Neurodegeneration untersucht. Da die Taurinverfügbarkeit inflammatorische Signalwege und die Proteostase beeinflusst, wird SLC6A6 häufig in pathway-basierten Modellen oxidativer Schädigung und mitochondrialer Dysfunktion untersucht.

TAUT Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLC6A6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TAUT Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLC6A6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLC6A6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TAUT-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLC6A6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TAUT-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TAUT-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLC6A6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.