Plasmide Double Nickase (h) Tak1: sc-400364-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Tak1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Tak1 Double Nickase (h) et le plasmide Tak1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MAP3K7. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Tak1 Antibody (C-9): sc-7967
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Tak1 | sc-400364-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Tak1 | sc-400364-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MAP3K7 code TAK1 (TGF-β–activated kinase 1), une MAP3K qui intègre les signaux issus de cytokines pro-inflammatoires et de récepteurs de reconnaissance des motifs (pattern-recognition receptors) afin de coordonner les réponses au stress et les réponses immunitaires. TAK1 phosphoryle les complexes MAPK et IKK en aval pour réguler les voies NF-κB, JNK et p38, façonnant des programmes transcriptionnels qui contrôlent l’inflammation, l’apoptose et les décisions de destin cellulaire. Dans les cellules humaines, l’activité de MAP3K7 influence la signalisation de l’immunité innée, l’homéostasie tissulaire et les réponses au stress génotoxique ou oxydatif, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la dérégulation inflammatoire et des réseaux de signalisation oncogéniques. La perturbation génétique de TAK1 est couramment utilisée pour disséquer les interactions (cross-talk) entre la signalisation des récepteurs TLR/IL-1R/TNF et la régulation transcriptionnelle pilotée par les MAPK.
Tak1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MAP3K7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MAP3K7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MAP3K7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MAP3K7.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.