TADA2B Double Nickaseプラスミド (h): sc-406224-NIC

TADA2Bは、SAGA/ATACヒストンアセチル化酵素（HAT）共活性化複合体の転写アダプター構成要素をコードしており、配列特異的転写因子とクロマチン修飾機構とを結び付けます。TADA2BはGCN5/PCAFや関連サブユニットとの相互作用を介して、ヒストンのアセチル化、プロモーターのアクセス性、および細胞周期制御・分化・細胞ストレス応答に関与する遺伝子発現プログラムの協調的な制御に寄与します。SAGA/ATAC複合体の完全性が損なわれると、エピジェネティック制御や転写恒常性が破綻し得ますが、これらの過程は腫瘍化（がん化）やその他の遺伝子制御異常疾患にしばしば関与します。クロマチン関連の制御因子として、TADA2Bは、ヒストンアセチル化が転写開始やヒト細胞におけるエンハンサー—プロモーター間コミュニケーションと結び付く仕組みを研究する上で重要です。

TADA2B ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TADA2B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TADA2B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TADA2Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TADA2Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。