Synaptotagmin II Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423244

Panoramica

Syt2 codifica la sinaptotagmina II, una proteina di membrana che lega Ca2+ e che funge da principale sensore rapido del Ca2+ per l’esocitosi delle vescicole sinaptiche e il rilascio sincrono dei neurotrasmettitori. Tramite i suoi domini C2, la sinaptotagmina II accoppia l’ingresso di Ca2+ evocato dal potenziale d’azione alla fusione di membrana dipendente dalle SNARE, modulando la probabilità di rilascio presinaptico e la plasticità a breve termine. Nei neuroni e nelle giunzioni neuromuscolari del topo, l’espressione di Syt2 è strettamente associata alla trasmissione rapida in circuiti definiti e nelle vie motorie. La disregolazione della fusione vescicolare innescata dal Ca2+ e dei meccanismi di rilascio presinaptico è di ampia rilevanza per gli studi di neurofisiologia e dei meccanismi delle malattie neurologiche, in cui la disfunzione sinaptica rappresenta una caratteristica centrale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Synaptotagmin II (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Syt2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Syt2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Syt2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Synaptotagmin II.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Syt2 per lo studio della segnalazione di Synaptotagmin II, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Syt2 critici per la funzione di Synaptotagmin II
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Syt2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Synaptotagmin II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Synaptotagmin II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Syt2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Synaptotagmin II Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Synaptotagmin II (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Syt2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Syt2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.