Superoxide Dismutase 1/SOD1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400186-ACT

SOD1 codifica a superóxido dismutase citosólica Cu/Zn, que catalisa a dismutação dos ânions superóxido em peróxido de hidrogênio e oxigênio, constituindo uma barreira enzimática primária contra espécies reativas de oxigênio. Ao moldar a homeostase redox, a SOD1 influencia as respostas ao estresse oxidativo, a função mitocondrial e vias de sinalização a jusante que regulam inflamação, proteostase e apoptose. Alterações na atividade da SOD1 perturbam a capacidade antioxidante celular e podem contribuir para o mau dobramento de proteínas e a vulnerabilidade de neurônios motores, com forte relevância para a neurodegeneração e fenótipos mais amplos associados ao estresse. Assim, a SOD1 humana é amplamente estudada em modelos de desequilíbrio redox, biologia da agregação e disfunção celular ligada a danos oxidativos.

Superoxide Dismutase 1/SOD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SOD1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Superoxide Dismutase 1/SOD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SOD1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SOD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Superoxide Dismutase 1/SOD1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SOD1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Superoxide Dismutase 1/SOD1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Superoxide Dismutase 1/SOD1 em células tumorais com expressão de SOD1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.