Sulf-2 Plasmídeo duplo de Nickase (m2): sc-428206-NIC-2

O gene Sulf2 de camundongo codifica a endossulfatase extracelular de heparan sulfato 6-O 2 (Sulf-2), uma enzima secretada que remodela o heparan sulfato presente na superfície celular e na matriz extracelular ao remover grupos 6-O-sulfato, modulando assim a disponibilidade de ligantes e as interações com receptores. Ao editar os padrões de sulfatação do heparan sulfato, a Sulf-2 influencia eixos de sinalização centrais, incluindo FGF, WNT, Hedgehog, BMP e gradientes de quimiocinas, moldando processos como migração celular, padronização tecidual, angiogênese e respostas inflamatórias. A atividade desregulada de SULF2 tem sido associada a alterações na dinâmica da matriz extracelular e a sinalização aberrante em contextos como biologia tumoral, fibrose e fenótipos do neurodesenvolvimento, tornando o Sulf2 um alvo útil para estudos mecanísticos de sinalização dependente de glicosaminoglicanos. A edição gênica de Sulf2 em modelos murinos permite a dissecação funcional do ajuste fino de vias dependentes de sulfatação, da regulação do nicho extracelular e de interações microambientais relevantes para doenças, in vitro e in vivo.

Sulf-2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m2) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Sulf2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Sulf2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Sulf2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Sulf2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.