Particules Lentivirales d'Activation (h) Stat3: sc-400027-LAC

Le gène humain **STAT3** code la protéine Stat3, un facteur de transcription cytoplasmique latent activé par la signalisation des cytokines et des facteurs de croissance. Après phosphorylation en aval des kinases JAK et des récepteurs à activité tyrosine kinase, Stat3 dimérise et se transloque dans le noyau pour réguler des programmes contrôlant la prolifération, la survie, l’inflammation et la différenciation, notamment des gènes de la phase aiguë et des gènes immunomodulateurs. STAT3 intègre des signaux provenant de voies telles que **IL-6/GP130–JAK–STAT** et **EGFR**, ainsi que des interactions (crosstalk) avec **NF-κB** et **PI3K/AKT**. Une activité de STAT3 dérégulée est fréquemment associée à une signalisation immunitaire altérée, à des états inflammatoires chroniques et à des réseaux transcriptionnels oncogéniques, ce qui en fait un nœud central pour les études mécanistiques de la transduction du signal et de la régulation de l’expression génique.

Les particules d'activation lentivirales Stat3 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de STAT3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Stat3 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription STAT3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Stat3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif STAT3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.