SSc5D Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418823-ACT

SSC5D codifica o membro humano da família de receptores “scavenger” ricos em cisteína, com múltiplos domínios SRCR (SSc5D), uma proteína de reconhecimento de padrões e de interação celular implicada na vigilância imune inata. A SSc5D tem sido associada à modulação da sinalização inflamatória e à regulação dos estados de ativação de leucócitos, conectando-a a vias que governam as interações hospedeiro–microrganismo e a homeostase imune dos tecidos. Padrões de expressão em contextos da linhagem mieloide e associados ao sistema imune tornam o SSC5D relevante para o estudo de mecanismos que moldam a função de células apresentadoras de antígeno, respostas de citocinas e o tráfego de células imunes. A expressão desregulada de SSC5D foi relatada em cenários de doenças inflamatórias e imunorrelacionadas, sustentando seu uso como um ponto de entrada molecular para investigar fenótipos imunes associados a doenças.

SSc5D O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SSC5D sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SSc5D O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SSC5D em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SSC5D, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SSc5D. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SSC5D nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SSc5D no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SSc5D em células tumorais com expressão de SSC5D silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.