Plasmide CRISPR/Cas9 KO SPRED2 (h): sc-404738

Présentation

SPRED2 (sprouty related EVH1 domain containing 2) code une protéine adaptatrice cytosolique qui régule négativement la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase en inhibant la cascade Ras–Raf–MEK–ERK/MAPK. Par ses interactions avec des composants tels que Raf et la neurofibromine, SPRED2 contribue à limiter la prolifération, la différenciation et la signalisation inflammatoire induites par les facteurs de croissance, participant au contrôle homéostatique des réponses cellulaires. Une expression ou une fonction altérée de SPRED2 a été associée à une activité MAPK dérégulée en cancérologie ainsi qu’à des processus immunitaires et inflammatoires, notamment dans des contextes de signalisation aberrante des cytokines et des chimiokines. En tant que frein de voie, SPRED2 est fréquemment étudiée pour son rôle dans l’ajustement de l’amplitude et de la durée de la signalisation en aval des RTK et d’autres signaux en amont convergeant vers ERK.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SPRED2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SPRED2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SPRED2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SPRED2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SPRED2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SPRED2 pour l'étude de la signalisation de SPRED2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SPRED2 essentiels à la fonction de SPRED2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SPRED2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SPRED2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SPRED2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SPRED2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SPRED2 plasmide HDR (h) et le SPRED2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SPRED2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SPRED2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.