Partículas Lentivirales de Activación (m) SPNS2: sc-432145-LAC

Spns2 codifica SPNS2, un transportador de membrana multipaso que exporta esfingosina-1-fosfato (S1P), un mediador lipídico que establece gradientes extracelulares de S1P que controlan el tráfico de células inmunitarias, la maduración vascular y la función de barrera endotelial. Al regular la disponibilidad de S1P para la señalización a través de S1PR1–S1PR5, SPNS2 influye en vías posteriores que incluyen PI3K–AKT, MAPK/ERK, la remodelación del citoesqueleto mediada por GTPasas Rho y la quimiotaxis impulsada por GPCR. En sistemas murinos, la alteración de la actividad de Spns2 se ha asociado con cambios en la salida de linfocitos, las respuestas inflamatorias y fenotipos vasculares, lo que la hace relevante para estudios de la homeostasis inmunitaria y la señalización del microambiente tisular. Por ello, este gen se utiliza ampliamente en investigaciones mecanísticas de la señalización lipídica, la comunicación cruzada endotelio–inmunidad y programas de tráfico sensibles al estrés.

Las partículas de activación lentiviral SPNS2 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Spns2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SPNS2 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Spns2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SPNS2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Spns2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.