SPAG17 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-410482

Panoramica

SPAG17 codifica l’antigene 17 associato agli spermatozoi, un componente strutturale e regolatorio dell’apparato assonemale che sostiene la funzione di ciglia motili e flagelli. Partecipa a processi basati sui microtubuli e contribuisce alla meccanica del battito guidata dalla dineina, necessaria per un’efficace motilità cellulare e per la propulsione dei fluidi attraverso gli epiteli. Nella biologia umana, un’alterata espressione o la compromissione di SPAG17 è associata a difetti della spermatogenesi e della motilità degli spermatozoi ed è rilevante anche per fenotipi più ampi legati alle ciliopatie, che coinvolgono alterazioni della struttura e della segnalazione ciliare. In quanto proteina associata a ciglia/flagelli, SPAG17 è utile anche per studiare come l’organizzazione del citoscheletro si integri con la dinamica del ciclo cellulare e con programmi di differenziamento specifici dei tessuti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SPAG17 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SPAG17 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SPAG17 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SPAG17 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SPAG17.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SPAG17 per lo studio della segnalazione di SPAG17, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SPAG17 critici per la funzione di SPAG17
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SPAG17 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SPAG17 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SPAG17 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SPAG17. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SPAG17 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SPAG17 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SPAG17 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SPAG17 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.