Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sp4: sc-402568-ACT

SP4 humain code le facteur de transcription Sp4, membre de la famille Sp/KLF, qui se lie à des éléments promoteurs riches en GC afin de réguler des programmes d’expression génique contrôlant la différenciation neuronale, la plasticité synaptique et la transcription dépendante de l’activité. Sp4 contribue à des processus de contrôle de la chromatine et de la transcription qui façonnent les trajectoires du neurodéveloppement et l’excitabilité neuronale, le reliant à des voies gouvernant la maturation des axones et des dendrites ainsi que la formation des circuits. Des altérations de l’expression ou de la fonction de SP4/Sp4 ont été associées à des phénotypes neuropsychiatriques et neurodéveloppementaux, ce qui étaye sa pertinence pour l’étude de la dérégulation des réseaux transcriptionnels dans le système nerveux. Dans des modèles cellulaires, la modulation de SP4 peut être utilisée pour analyser les gènes cibles en aval et les circuits de régulation génique qui influencent les états neuronaux et gliaux.

Sp4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SP4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sp4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SP4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SP4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sp4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SP4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sp4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sp4 dans les cellules tumorales présentant une expression de SP4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.