Sox-18 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402913-ACT

SOX18 kodiert Sox-18, einen HMG-Box-Transkriptionsfaktor, der an DNA bindet und mit anderen Mitgliedern der SOX-Familie kooperiert, um Genprogramme zu regulieren, die die vaskuläre und lymphatische Entwicklung, die Spezifikation von Endothelzellen und die Gewebemorphogenese steuern. Sox-18 beeinflusst transkriptionelle Netzwerke, die mit der Integrität endothelialer Zell-Zell-Kontakte, dem Aussprossen von Gefäßen und dem Gefäßumbau verbunden sind, und greift dabei in Signalachsen wie VEGF-getriebene angiogene Antworten sowie entwicklungsbiologische Transkriptionsschaltkreise ein. Eine veränderte SOX18-Aktivität wurde mit einer fehlregulierten vaskulären/lymphatischen Musterbildung und tumorassoziierter Angiogenese in Verbindung gebracht, was SOX18 für die Untersuchung der Plastizität von Endothelzellen und der Regulation durch das Mikromilieu relevant macht. In humanen Zellmodellen wird die Modulation der Sox-18-Expression häufig eingesetzt, um Linienentscheidungen, Barrierefunktion und vaskuläre Genregulationsnetzwerke zu untersuchen.

Sox-18 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SOX18-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Sox-18 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SOX18-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SOX18-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Sox-18-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SOX18-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Sox-18-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Sox-18-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SOX18-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.