Date published: 2026-7-14

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Sororin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403556

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Schede Tecniche
  • Specie Target: human
  • 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
  • Sororin Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
  • Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Sororin, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
  • Sororin HDR Plasmid (h) (sc-403556-HDR) è raccomandato per la cotrasfezione con Sororin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) per consentire la selezione delle cellule modificate con successo attraverso l'integrazione mediata da HDR di un cassetto di resistenza alla puromicina e del gene reporter RFP
  • Il Sororin Plasmid HDR (h) è un pool di plasmidi, ciascuno contenente un modello di riparazione diretta dall'omologia (HDR) corrispondente ai siti bersaglio del gRNA nel Sororin Plasmid CRISPR/Cas9 KO (h)
  • Ciascun plasmide HDR contiene due bracci di omologia di circa 800 bp che fiancheggiano i cassetti di resistenza alla puromicina e RFP, progettati per legarsi alle sequenze di DNA genomico che circondano il sito di rottura a doppio filamento indotto da Cas9 e facilitare l'integrazione precisa mediata da HDR
  • I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
  • In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Sororin Antibody (B-9): sc-365319
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    Nome del prodottoCodice del prodottoUNITÀPrezzoQuantitàPreferiti

    Sororin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h)

    sc-403556
    20 µg
    $397.00

    Sororin Plasmide HDR (h)

    sc-403556-HDR
    20 µg
    $445.00

    Panoramica

    CDCA5 codifica sororin, un regolatore associato alla cromatina essenziale per la coesione delle cromatidi sorelle durante la fase S e la mitosi. Sororin stabilizza i complessi della coesina sul DNA replicato contrastando il rilascio della coesina mediato da WAPL, sostenendo così una corretta segregazione cromosomica e la stabilità del genoma. Grazie al suo collegamento con il controllo del ciclo cellulare, le risposte allo stress replicativo e la segnalazione del danno al DNA, un’attività alterata di CDCA5 può compromettere la fedeltà mitotica ed è spesso studiata nel contesto di stati proliferativi e di aneuploidia associata ai tumori. Sororin offre inoltre un punto di accesso meccanicistico per esaminare la regolazione genica dipendente dalla coesina e l’organizzazione della cromatina di ordine superiore.

    Sororin Il plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CDCA5 in human linee cellulari. Ogni plasmide del pool co-esprime un sgRNA unico, mirato a un sito distinto all'interno del locus CDCA5, insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes, e codifica per la GFP per consentire l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo. Questa strategia multi-guida aumenta la probabilità di indurre spostamenti di lettura o delezioni che producono un knockout funzionale, offrendo un'alternativa più robusta agli approcci a guida singola. Le DSB indotte in più siti vengono risolte tramite giunzione non omologa (NHEJ) o, se utilizzate con il modello donatore HDR incluso, tramite riparazione diretta dall'omologia (HDR) in un sito bersaglio definito all'interno del locus.

    Se utilizzato in combinazione con il donatore HDR che esprime RFP, la fluorescenza GFP e RFP può essere utilizzata insieme per distinguere le popolazioni cellulari trasfettate da quelle modificate, semplificando i flussi di lavoro di selezione e selezione dei cloni basati sulla citometria a flusso.

    Donatore per riparazione diretta dall'omologia (HDR) — Cassetta puromicina con reporter RFP

    Per applicazioni che richiedono cloni knockout confermati e selezionabili, il Sororin Plasmide HDR (h) include un costrutto donatore HDR contenente una cassetta di resistenza alla puromicina (PuroR) e un reporter proteina fluorescente rossa (RFP), affiancati da bracci di omologia specifici per un sito bersaglio definito CDCA5.
    Se cotrasfettato con il Sororin Plasmide CRISPR/Cas9 KO (h):

    • La cassetta PuroR-RFP si integra nel sito di taglio di Cas9 tramite HDR, interrompendo il frame di lettura aperto CDCA5.
      La fluorescenza RFP fornisce un indicatore visivo immediato dell'integrazione riuscita, consentendo l'identificazione o la selezione basata sulla fluorescenza delle cellule modificate prima o parallelamente alla selezione con puromicina.
      Le cellule modificate con successo vengono confermate attraverso la resistenza alla puromicina, riducendo sostanzialmente il carico di screening dei cloni.
      Questa strategia di selezione è ideale per generare linee cellulari KO clonali stabili per studi funzionali a valle, screening farmacologico o sviluppo di modelli.

    Sistema di rimozione della cassetta Cre-lox

    Il costrutto donatore HDR presenta siti loxP che fiancheggiano la cassetta di selezione PuroR-RFP per consentire la rimozione pulita del marcatore dopo la conferma del clone. L'espressione transiente della ricombinasi Cre tramite il vettore Cre incluso : sc-418923 elimina la cassetta, lasciando un sito loxP residuo minimo all'interno del locus CDCA5 ed eliminando potenziali effetti confondenti sui saggi a valle.
    Questo approccio in due fasi:

    • Riduce al minimo la perturbazione dell'architettura cromatinica locale e degli elementi regolatori adiacenti
      Ripristina un contesto genomico quasi nativo nel locus modificato
      Consente il riutilizzo della strategia di selezione con puromicina nella stessa linea cellulare per ulteriori modifiche

    Caratteristiche principali

    • gRNA mirato agli esoni CDCA5 critici per la funzione Sororin
      Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
      Donore HDR con resistenza alla puromicina per la selezione positiva dei cloni
      Cassetta PuroR fiancheggiata da loxP con vettore ricombinasi Cre per la rimozione senza soluzione di continuità del marcatore
      Fornito pronto all'uso per la somministrazione tramite trasfezione

    Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.