Plasmide CRISPR d'Activation (h) SOCS-3: sc-400455-ACT

SOCS3 code le suppresseur de la signalisation des cytokines 3 (SOCS-3), un régulateur de rétrocontrôle négatif induit par les cytokines, qui limite la signalisation JAK/STAT en aval des récepteurs des cytokines de la famille de l’IL-6, de la leptine et des interférons. SOCS-3 se lie aux récepteurs phosphorylés et aux kinases JAK via son domaine SH2 et favorise leur dégradation médiée par l’ubiquitine grâce à sa boîte SOCS, modulant ainsi l’amplitude et la durée du signal. En contrôlant ces programmes transcriptionnels inflammatoires et métaboliques, SOCS-3 influence l’activation des cellules immunitaires, les réponses de phase aiguë et la sensibilité à l’insuline. Une expression dérégulée de SOCS3 a été associée à l’inflammation chronique et au dysfonctionnement immunitaire, et le gène est fréquemment étudié dans des contextes tels que la signalisation oncogénique de STAT, les mécanismes des maladies métaboliques et les réponses cytokiniques induites par les pathogènes.

SOCS-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SOCS3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SOCS-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SOCS3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SOCS3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SOCS-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SOCS3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SOCS-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SOCS-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de SOCS3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.