smoothelin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400923

Descripción general

SMTN codifica la smootelina, una proteína del citoesqueleto que está selectivamente enriquecida en células de músculo liso totalmente diferenciadas, donde se asocia con la organización de los filamentos de actina y la integridad del aparato contráctil. La smootelina contribuye a la regulación de la contractilidad del músculo liso, la arquitectura celular y la estabilidad fenotípica durante la remodelación del músculo liso vascular y visceral. Los patrones alterados de expresión de SMTN se utilizan como marcadores del estado de diferenciación del músculo liso y se implican en procesos como la remodelación vascular, las transiciones de miofibroblastos asociadas a la fibrosis y los cambios en el tono vascular. Como componente del citoesqueleto restringido a un linaje, SMTN es relevante para estudiar los mecanismos que gobiernan la maduración del músculo liso, la mecanotransducción y las redes de señalización del citoesqueleto.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO smoothelin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SMTN en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SMTN junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SMTN tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína smoothelin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SMTN para la investigación de la señalización de smoothelin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SMTN críticos para la función de smoothelin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SMTN para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido smoothelin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido smoothelin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SMTN. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR smoothelin (h) y el plásmido HDR smoothelin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SMTN para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SMTN definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.