Particules Lentivirales d'Activation (h) SMARCA4/Brg1: sc-400168-LAC

SMARCA4 (BRG1) code la sous-unité catalytique ATPase du complexe de remodelage de la chromatine SWI/SNF (BAF), qui mobilise les nucléosomes afin de réguler l’accessibilité de l’ADN et les programmes transcriptionnels. Grâce au remodelage de la chromatine dépendant de l’ATP, SMARCA4 influence la spécification des lignages, le contrôle du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et l’activité des enhancers, en intégrant les signaux de signalisation à l’état épigénétique. SMARCA4 intervient dans des voies contrôlant l’organisation de la chromatine et la régulation transcriptionnelle, notamment via des interactions avec des suppresseurs de tumeurs et des régulateurs du développement. Des altérations génétiques ou une expression dérégulée de SMARCA4 sont impliquées dans de multiples défauts de remodelage de la chromatine associés au cancer et en font un nœud clé pour l’étude des mécanismes épigénétiques de la biologie des maladies.

Les particules d'activation lentivirales SMARCA4/Brg1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SMARCA4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SMARCA4/Brg1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SMARCA4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de SMARCA4/Brg1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SMARCA4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.