Plasmide Double Nickase (h) SIRT5: sc-416994-NIC

SIRT5 code une désacylase mitochondriale de la famille des sirtuines, dépendante du NAD+, qui élimine préférentiellement les modifications lysine succinylées, malonylées et glutarylées, modulant ainsi l’activité enzymatique au sein du métabolisme central. En régulant des voies telles que le cycle de l’urée, l’oxydation des acides gras et la phosphorylation oxydative, SIRT5 contribue au maintien de l’homéostasie mitochondriale et de l’équilibre rédox face aux fluctuations de nutriments et aux stress. Une activité altérée de SIRT5 a été associée au remodelage métabolique, aux réponses au stress oxydant et au dysfonctionnement mitochondrial observés dans divers contextes de recherche en cancérologie et en cardiométabolisme. En tant que régulateur post-traductionnel des protéines mitochondriales, SIRT5 est fréquemment étudiée pour son impact sur les états d’acylation du protéome et sur les réseaux de signalisation en aval qui couplent l’état énergétique à l’adaptation cellulaire.

SIRT5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SIRT5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SIRT5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SIRT5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SIRT5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.