Plásmido CRISPR de Activación (h) Sialyltransferase 7A: sc-406723-ACT

ST6GALNAC1 codifica la sialiltransferasa humana 7A, una glicosiltransferasa residente del aparato de Golgi que cataliza la sialilación α2,6 de residuos de GalNAc en O‑glicanos, contribuyendo a definir los patrones de glicosilación tipo mucina en la superficie celular y en proteínas secretadas. Al controlar la presentación terminal de ácido siálico, influye en procesos dependientes de glicanos, como la estabilidad proteica, las interacciones receptor–ligando y la señalización mediada por lectinas dentro de la vía secretora. La actividad alterada de ST6GALNAC1 puede modificar la composición de glicoepítopos sialilados y se ha relacionado con cambios en la adhesión celular y en el reconocimiento inmunitario, por lo que es relevante en estudios de glicosilación asociada a tumores y de microambientes inflamatorios. Por ello, este gen se examina con frecuencia en análisis a nivel de vías sobre remodelación de la glicosilación, diferenciación epitelial y comunicación célula–matriz.

Sialyltransferase 7A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ST6GALNAC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Sialyltransferase 7A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ST6GALNAC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ST6GALNAC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Sialyltransferase 7A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ST6GALNAC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Sialyltransferase 7A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Sialyltransferase 7A en células tumorales con expresión de ST6GALNAC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.