Sgo2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404058-ACT

ヒトSGO2は、シュゴシン2（Sgo2）をコードしており、Sgo2はセントロメアに局在してコヒーシンを保護する因子として、有糸分裂および減数分裂における姉妹染色分体の結合（コヒージョン）の維持と、正確な染色体分配を助けます。Sgo2はキネトコア‐セントロメアの制御機構の中で機能し、ホスファターゼ依存的なシグナル伝達と協調して、コヒーシンの早期解離に拮抗するとともに、適切な紡錘体付着とチェックポイントの忠実性を支えます。SGO2により制御されるコヒージョン動態が破綻すると、染色体不安定性や異数性が促進される可能性があり、これらは腫瘍生物学や発生異常でしばしば関与が示される過程です。そのためSGO2は、細胞周期制御、DNA損傷応答、ゲノム維持を結び付ける経路の中で研究されています。

Sgo2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SGO2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Sgo2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SGO2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSGO2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Sgo2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSGO2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSgo2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSGO2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSgo2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。