Plásmido Doble Nickase (h) serum reponse factor /SRF: sc-400470-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)serum reponse factor /SRF consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa serum reponse factor /SRF (h) y el plásmido de doble nickasa serum reponse factor /SRF (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a SRF. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: serum reponse factor /SRF Anticuerpo (A-11): sc-25290
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) serum reponse factor /SRF | sc-400470-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) serum reponse factor /SRF | sc-400470-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El SRF (factor de respuesta al suero) humano es un factor de transcripción de tipo MADS-box que se une a elementos de respuesta al suero para regular la expresión de genes de respuesta inmediata y programas del citoesqueleto de actina. Actúa aguas abajo de la señalización MAPK/ERK y de la dinámica RhoA–actina a través de cofactores como ELK1 y los factores de transcripción relacionados con la miocardina, coordinando la proliferación, la migración y la diferenciación. La transcripción dependiente de SRF ayuda a mantener la homeostasis del citoesqueleto y las transiciones de estado celular, vinculándola con procesos como la miogénesis, el neurodesarrollo y la remodelación vascular. La actividad desregulada de SRF se ha asociado con la invasividad de células tumorales y con redes transcripcionales alteradas de respuesta al estrés relevantes para la biología del cáncer y los mecanismos de la enfermedad cardiovascular.
serum reponse factor /SRF El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SRF en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SRF. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SRF. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SRF alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.