Plasmide CRISPR d'Activation (h) serum reponse factor /SRF: sc-400470-ACT

Le SRF humain (serum response factor) est un facteur de transcription à domaine MADS-box qui se lie aux éléments de réponse au sérum afin de coordonner des programmes d’expression de gènes de réponse immédiate et précoce en réponse aux facteurs de croissance, aux mitogènes et aux signaux mécaniques. Il intègre la signalisation via la dynamique RhoA–actine grâce aux cofacteurs MRTF, ainsi que les voies MAPK/ERK via les facteurs du complexe ternaire, pour réguler l’organisation du cytosquelette, l’adhésion cellulaire, la migration et la différenciation myogénique. Les réseaux transcriptionnels dépendants du SRF façonnent l’expression génique des muscles lisses et du muscle cardiaque, ainsi que des processus plus larges de remodelage sensibles au stress. Une activité du SRF dérégulée a été associée à une signalisation proliférative aberrante, à une motilité altérée et à un remodelage tissulaire pathologique, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques des circuits de régulation génique.

serum reponse factor /SRF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SRF sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

serum reponse factor /SRF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SRF dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SRF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de serum reponse factor /SRF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SRF natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de serum reponse factor /SRF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie serum reponse factor /SRF dans les cellules tumorales présentant une expression de SRF silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.