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Selenoprotein PCRISPR激活质粒(h) | sc-417457-ACT | 20 µg | $397.00 |
SELENOP 编码硒蛋白 P(selenoprotein P),这是一种分泌型糖蛋白,是血浆中主要的硒转运因子,支持硒在全身范围内向外周组织的分配。SELENOP 通过递送硒以用于硒酶的生物合成,促进细胞氧化还原稳态、抗氧化防御,并在氧化与炎症应激中发挥保护作用,与肝功能和代谢调控相关。SELENOP 表达的改变与氧化应激反应失衡及代谢性疾病表型有关,因此常在胰岛素信号、脂质代谢和炎症通路等研究背景下被检测。作为一种类似肝激素(hepatokine)的循环因子,硒蛋白 P 也常被用作评估肝脏分泌程序以及营养状态响应性转录调控的分子读出指标。
Selenoprotein P CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SELENOP的表达。
Selenoprotein P CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的SELENOP基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于SELENOP转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Selenoprotein P表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的SELENOP位点,并能够研究内源性位点上依赖于Selenoprotein P的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SELENOP表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Selenoprotein P通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。