Sel-1LCRISPR激活质粒(h): sc-403861-ACT
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Sel-1L CRISPER激活质粒（h）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- Sel-1L CRISPR 激活质粒 (h)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 Sel-1L CRISPR 激活质粒 (h) 和 Sel-1L CRISPR 激活质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别针对 SEL1L 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：Sel-1L: sc-377350，通过WB, IF或者IHC分析
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Sel-1LCRISPR激活质粒(h) | sc-403861-ACT | 20 µg | $397.00 |
SEL1L 基因编码 Sel-1L 蛋白，它是内质网相关降解（ERAD）机制的核心组分之一，并与 HRD1 协同作用，用于识别错误折叠的分泌蛋白和膜蛋白，将其逆向转运出内质网，并促进其经由泛素依赖的蛋白酶体途径清除。通过这一功能，Sel-1L 维持内质网蛋白稳态（proteostasis）、调控未折叠蛋白反应（UPR）信号，并影响多种与分化和应激适应相关底物的稳定性。SEL1L 的活性与内质网质量控制、泛素连接酶复合体以及分泌通路稳态等通路相互交叉，而这些过程在以慢性内质网应激为特征的疾病状态中常常发生紊乱。关于 ERAD 能力失调以及 SEL1L 表达改变的研究，已在神经退行性疾病、代谢功能障碍和肿瘤生物学等领域展开，被认为可能是将蛋白毒性应激与细胞命运决策联系起来的机制之一。
Sel-1L CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SEL1L的表达。
Sel-1L CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的SEL1L基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于SEL1L转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Sel-1L表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的SEL1L位点，并能够研究内源性位点上依赖于Sel-1L的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SEL1L表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Sel-1L通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。