Scrib CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400384-ACT

Das humane Gen **SCRIB** kodiert **Scrib**, ein konserviertes Polaritäts‑Scaffold, das an basolateralen Membranen lokalisiert und die Assemblierung von Proteinkomplexen koordiniert, die die apikal‑basale Polarität, die Integrität von Adhärenskontakten und die gerichtete Zellmigration steuern. Scrib interagiert mit zentralen Polaritätsmodulen und Signalnetzwerken, darunter die Hippo‑Signalweg‑Regulation von YAP/TAZ, die Dynamik der MAPK‑Signalübertragung sowie Prozesse der planaren Zellpolarität, die die Gewebearchitektur prägen. Eine veränderte SCRIB‑Expression oder Fehl-Lokalisierung wird mit gestörter epithelialer Organisation, aberranter Zytoskelett‑Remodellierung und Veränderungen der Kontaktinhibition in Verbindung gebracht – Phänotypen, die häufig bei maligner Transformation und metastatischer Progression beobachtet werden. Entsprechend wird SCRIB in Modellen der epithelialen Homöostase, Invasion und Signalintegration an Zell‑Zell‑Kontakten breit untersucht.

Scrib Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SCRIB-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Scrib Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SCRIB-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SCRIB-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Scrib-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SCRIB-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Scrib-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Scrib-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SCRIB-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.