Sar1a Plasmide Double Nickase (h): sc-404190-NIC

SAR1A codifica Sar1a, una piccola GTPasi del complesso COPII che avvia l’assemblaggio del rivestimento nei siti di uscita dal reticolo endoplasmatico, guidando il trasporto dal RE all’apparato di Golgi. Alternando gli stati legati a GDP e a GTP, Sar1a recluta Sec23/24 e promuove la gemmazione delle vescicole, collegando il traffico secretorio all’omeostasi di membrana e alla proteostasi. Le dinamiche di COPII dipendenti da SAR1A influenzano la secrezione di componenti della matrice extracellulare e di lipoproteine, e le alterazioni della funzione della via secretoria precoce sono rilevanti per le risposte cellulari allo stress e per patologie associate a un traffico proteico difettoso. Nei modelli cellulari umani, Sar1a viene spesso studiata per il suo ruolo nella regolazione della via secretoria, nell’organizzazione degli organelli e per l’impatto a valle su segnalazione e metabolismo.

Sar1a Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SAR1A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SAR1A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SAR1A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SAR1A interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.