Plásmido Doble Nickase (h) Sar1a: sc-404190-NIC

SAR1A codifica Sar1a, una pequeña GTPasa COPII que inicia el ensamblaje de la cubierta en los sitios de salida del retículo endoplásmico para impulsar el transporte del RE al Golgi. Al alternar entre los estados unidos a GDP y a GTP, Sar1a recluta Sec23/24 y favorece la gemación de vesículas, vinculando el tráfico secretor con la homeostasis de membrana y la proteostasis. La dinámica de COPII dependiente de SAR1A influye en la secreción de componentes de la matriz extracelular y de lipoproteínas, y las alteraciones en la función de la vía secretora temprana son relevantes para las respuestas de estrés celular y para trastornos que implican un tráfico proteico defectuoso. En modelos de células humanas, Sar1a se estudia con frecuencia por sus funciones en la regulación de la vía secretora, la organización de orgánulos y el impacto posterior en la señalización y el metabolismo.

Sar1a El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SAR1A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SAR1A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SAR1A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SAR1A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.