Plasmide Double Nickase (h) RUNX1: sc-400803-NIC

RUNX1 code un facteur de transcription de la famille « runt » qui forme avec CBFB un complexe se liant à l’ADN afin de contrôler des programmes d’expression génique spécifiques de lignée au cours de l’hématopoïèse définitive. Il régule la différenciation, l’auto-renouvellement et la coordination du cycle cellulaire des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques en intégrant des signaux issus de voies telles que TGF-β/BMP, Wnt et des réseaux transcriptionnels induits par les cytokines. RUNX1 participe également au remodelage de la chromatine et à la sélection des enhancers pour établir des états transcriptionnels myéloïdes et lymphoïdes. La dérégulation de RUNX1 par mutation, translocation ou altération de l’expression est fortement associée à la biologie des hémopathies malignes et à des défauts du développement des cellules sanguines, ce qui en fait une cible centrale pour les études mécanistiques de la régulation génique et les modèles de leucémogenèse.

RUNX1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RUNX1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RUNX1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RUNX1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RUNX1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.