Plasmide CRISPR d'Activation (m) RUNX1: sc-419483-ACT

Runx1 code le facteur de transcription apparenté à Runt RUNX1, un régulateur central de l’hématopoïèse définitive qui contrôle l’engagement de lignée ainsi que la maturation des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques. RUNX1 agit au sein de réseaux transcriptionnels avec des cofacteurs tels que CBFβ et intègre des signaux pour coordonner l’accessibilité de la chromatine, l’activité des enhancers et les programmes du cycle cellulaire au cours de la différenciation myéloïde et lymphoïde. Dans des modèles murins, une modification de la dose ou de l’activité de Runx1 perturbe le développement sanguin, affecte l’homéostasie des cellules immunitaires et établit des liens mécanistiques avec la leucémogenèse et des phénotypes d’insuffisance médullaire. Ce gène est fréquemment étudié dans les voies qui régissent l’auto-renouvellement des cellules souches, les points de contrôle de la différenciation et la dérégulation transcriptionnelle oncogénique.

RUNX1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Runx1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RUNX1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Runx1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Runx1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RUNX1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Runx1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RUNX1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RUNX1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Runx1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.