RORγ Plasmide Double Nickase (h): sc-400912-NIC

RORC codifica il recettore nucleare RORγ, un fattore di trascrizione regolato da ligando che si lega agli elementi di risposta ROR per controllare programmi genici coinvolti nella differenziazione immunitaria e nel metabolismo. RORγ è un regolatore centrale dell’impegno di linea delle cellule Th17 e dell’espressione delle citochine della famiglia IL-17, integrando segnali provenienti dalle reti citochiniche e dalla segnalazione dei recettori nucleari per plasmare stati trascrizionali infiammatori. Oltre ai ruoli nell’immunità adattativa, RORγ contribuisce all’organogenesi dei tessuti linfoidi e a un controllo trascrizionale più ampio nelle cellule ematopoietiche. Un’attività deregolata di RORC/RORγ è stata implicata in vie associate a infiammazione cronica e autoimmunità, nonché nella biologia del microambiente tumorale-immunitario, rendendolo un bersaglio frequente per studi meccanicistici della segnalazione immunitaria.

RORγ Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RORC nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RORC. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RORC. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RORC interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.