Plásmido CRISPR de Activación (h) RORγ: sc-400912-ACT

RORC codifica el receptor nuclear RORγ, un factor de transcripción regulado por ligandos que coordina programas génicos implicados en la diferenciación inmunitaria y la inflamación tisular. En células T humanas, la actividad de la isoforma RORγt es fundamental para el compromiso con el linaje Th17 y la regulación de redes de citocinas como IL-17A/F y las vías sensibles a IL-23, lo que lo vincula con la defensa del huésped y la biología de la barrera mucosa. RORγ también integra señales transcripcionales asociadas al metabolismo y al ritmo circadiano mediante la señalización de receptores nucleares y la remodelación de la cromatina. La expresión o señalización desregulada de RORC se ha asociado con mecanismos de enfermedades inflamatorias y autoinmunes, así como con interacciones alteradas entre tumor e inmunidad, lo que lo convierte en un nodo útil para el interrogatorio de vías en modelos de inmunología y biología del cáncer.

RORγ El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RORC sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RORγ El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RORC en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RORC, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RORγ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RORC y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RORγ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RORγ en células tumorales con expresión de RORC silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.