Partículas Lentivirales de Activación (h) RKIP: sc-401270-LAC

El gen humano **PEBP1** codifica la **proteína inhibidora de la quinasa Raf** (RKIP), un modulador conservado de la transducción de señales intracelulares que restringe la señalización **MAPK/ERK** al interferir con las interacciones **RAF–MEK**, y que también influye en las vías de **GPCR** mediante la regulación de **GRK2**. RKIP contribuye al equilibrio entre proliferación, diferenciación, apoptosis y respuestas al estrés, y puede moldear la comunicación cruzada entre vías que involucran **NF-κB** y otros programas transcripcionales. La alteración de la expresión de RKIP se ha asociado con cambios en la motilidad celular, fenotipos relacionados con la invasión y estados de señalización inflamatoria en diversos modelos de enfermedad. Como regulador nodal de la señalización, PEBP1 se investiga con frecuencia en estudios sobre el reconfigurado de redes de quinasas, el control por retroalimentación y las salidas transcripcionales dependientes del contexto.

Las partículas de activación lentiviral RKIP (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PEBP1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral RKIP (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PEBP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de RKIP. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PEBP1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.